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劃痕實(shí)驗(yàn)怎么做

 更新時(shí)間:2024-09-23    點(diǎn)擊量:340

一、準(zhǔn)備工作6孔板,marker,直尺,無血清培養(yǎng)基,完quan培養(yǎng)基,PBS,離心管,胰酶。

二、實(shí)驗(yàn)步驟:培養(yǎng)板劃線一計(jì)數(shù)一鋪板一細(xì)胞劃線一清洗一培養(yǎng)并觀察一結(jié)果分析
1.使用marker筆在6孔板背后,用直尺均勻地劃橫線,每隔0.5~1cm劃一道,橫穿過孔,每孔至少穿過5條線。
2.通過胰酶消化細(xì)胞制備細(xì)胞懸液。細(xì)胞計(jì)數(shù)后鋪板,確保每組細(xì)胞鋪板密度一致,一般在孔內(nèi)接種約5-10×105個(gè)細(xì)胞(可根據(jù)細(xì)胞的生長速度調(diào)整接種數(shù)量)。

3第二天,使用移液槍槍頭(20ul),與細(xì)胞平面垂直,在細(xì)胞層上沿著marker筆印記進(jìn)行劃痕(畫十字)。

4.劃痕完成后,吸取舊培養(yǎng)基,然后使用無菌PBS洗滌細(xì)胞3次,洗去劃痕下的細(xì)胞,使留下的間隙肉眼可見清晰。接著加入新鮮無血清或低血清(<2%)的培養(yǎng)基,使用顯微鏡拍照,作為對照組。

根據(jù)需要設(shè)立實(shí)驗(yàn)組和對照組。對于不需要藥物的空白對照組,只需添加等量的無血清培養(yǎng)基即可;而藥物干預(yù)組則需加入含藥物的無血清培養(yǎng)基。

5.首先需將細(xì)胞置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。接著,在不同時(shí)間點(diǎn)(如0、612、24小時(shí)),取出細(xì)胞進(jìn)行顯微鏡觀察,并拍照記錄。

6.劃痕實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)分析,通常有兩種主要方法:
第一種是根據(jù)細(xì)胞的遷移距離進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。這一方法通過比較初始劃痕線與后續(xù)觀察點(diǎn)的劃痕距離來評估細(xì)胞的遷移能力。
第二種方法是通過劃痕面積來進(jìn)行分析。這種方法則通過對比初始劃痕線與后續(xù)觀察點(diǎn)的劃痕面積來評估細(xì)胞遷移的情況。在進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析時(shí),這兩種指標(biāo)都可以被有效地使用來評估細(xì)胞的遷移能力。

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